欢迎光临武汉菲恩生物科技有限公司!网站
咨询热线
18040548172
ARTICLE/ 技术文章
首页  >  技术文章  >  实际科研应用时抗体怎么选择?

实际科研应用时抗体怎么选择?

发布时间:2021-04-27浏览:167次

抗体属于异质化产品,不同品牌之间,相同品牌不同产品之间,抗体品质差异都较为明显,没有统一的衡量标准。Nature多次发文指出:由于品牌、批次、生产方式、实验条件等差异,抗体具有严重的多态性,易导致重复性问题。2012年,来自著名生物医药公司Amgen的科学家Glenn Begley领导了一次关于可再现性的研究。他们挑选了53份具有“标志性意义”的癌症前临床研究论文,试图重复出这些研究成果。结果却令人大失所望:仅有6份论文(11%)的研究成果被重复出来。数据表明,这些癌症研究都使用了抗体产品,而抗体的差异性和不可靠性正是导致这些研究成果无法被复制的主要原因。
鉴于抗体验证的必要性和迫切性,国际上,很多组织机构提出了一些卓有成效的措施以指导抗体验证,汇总起来主要是以下几种方案:利用CRISPR或RNAi等技术敲除或降低目标基因的表达;将免疫捕获与MS分析相结合,以确定与纯化的抗体直接作用的蛋白质;发展结构更明确的重组抗体以取代单克隆抗体和多克隆抗体等。
抗体验证工作是一项长期而艰巨的任务,需要行业整体持续的努力。而具体到每个抗体试剂使用者,当我们在实验中需要检测目的蛋白在组织中的表达情况的时候,如何选择适合我们实验需要的抗体,并妥善保存使用,是每个科研人员需要细心考虑的。
检测任何目的靶蛋白的抗体都不止一种,如何筛选出我们需要的抗体,主要有以下几个步骤:首先我们需要确定抗体名称,注意中英文名称和别名、背景信息;其次我们需要分析样本中目的蛋白的结构性质,根据蛋白本身结构域的信息和样本预处理过程中发生的可能变化,判断所选抗体需识别的表位区域和被验证的具体实验应用,如WB、IHC、ICC、ELISA、FCM等;然后还需要分析抗体的种属反应特异性,一般抗体说明书都会列出已经验证过的种属信息,如可用于rat、mouse、human、pig、goat等;最后,在含有二抗的实验体系中,一抗种属来源的选择,应与实验种属亲缘性越远越好,以减少同源性造成的交叉反应。

 

除此之外,二抗应来源于抗一抗的物种,比如一抗来源于兔,那么二抗就应选择抗兔的。二抗标记方式通常有偶联HRP、AP、Biotin、荧光素等,应根据所需开展的实验选择合适标记方式的二抗。