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有谁想知道camp检测试剂盒操作使用相关技巧

发布时间:2021-09-03浏览:108次
  camp检测试剂盒的蛋白激酶A[PKA],将代谢途径中的一些靶蛋白中的丝氨酸或苏氨酸残基磷酸化,将其激活或钝化。这些被共价修饰的靶蛋白往往是一些关键调节酶或重要功能蛋白, 因而可以介导胞外信号,调节细胞反应。当cAMP信号终止后,靶蛋白的活性则在蛋白质脱磷酸化作用下恢复原状。
  camp检测试剂盒用纯化的小鼠环磷酸腺苷(cAMP)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入环磷酸腺苷,再与HRP标记的环磷酸腺苷抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的环磷酸腺苷呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中小鼠环磷酸腺苷浓度。
  camp检测试剂盒操作注意事项:
  1、试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
  2、实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
  3、不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
  4、使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。
  5、使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
  6、洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
  7、底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
  8、加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
  9、按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

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